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如何修|煉成流式高手 -方案設(shè)計(上)
我們時常會遇到,明明染色Marker都來自一篇文獻(xiàn),但是后實驗結(jié)果卻變成“買家秀與賣家秀”。
產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是什么?以及我們?yōu)槭裁匆绾蝺?yōu)化我們的染色方案呢?我們先看具體的例子。
方案1與方案2,所選擇的marker都*一致,所選用的熒光素種類一樣,但是搭配不一樣。那么我們看看同一個樣本,后各個細(xì)胞亞群的結(jié)果一樣嗎?
方案1與方案2,CD4+CD25+ 的百分比接近(A與C比較),可是CD8+CD69+的百分比卻相差很多(C與D比較)。
造成這種原因其實就是我們平時說到到spreading現(xiàn)象。
Nguyen, Richard, et al. "Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design." Cytometry Part A 83.3 (2013): 306-315.
如果要優(yōu)化流式染色方案中,由spreading現(xiàn)象產(chǎn)生的分辨率降低,我們可以使用SWOFF方法。通過如下流程,就可以很快找出究竟是由于那個通道的配色不合理,導(dǎo)致分辨能力下降。
在不同的檢測平臺,元件的光電轉(zhuǎn)化效率會直接影響儀器總體分辨率。
不僅如此,科技的進(jìn)步帶來的還有更小的spreading現(xiàn)象,這使得配色也更加的輕松,結(jié)果也更加的準(zhǔn)確。
你想知道如何檢查自己的染色方案么?利用SWOFF的方法,可以幫您發(fā)現(xiàn)并且優(yōu)化,使檢測更加準(zhǔn)確。點擊下方閱讀全文,獲取SWOFF的詳細(xì)步驟。